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A cultura do milho (Zea mays) corresponde a 27% da área plantada em todo o Brasil e está fortemente ligada com a crescente produção de alimentos, pois este grão é utilizado para consumo humano e elaboração de rações para a produção animal. O aumento da produtividade tem sido fundamental em taxas superiores a 2,5% ao ano e tem sido obtido, em parte, com o uso de sementes transgênicas (OGMs, Organismos Geneticamente Modificados). Na atual safra de milho, 253 (54,2%) das 467 cultivares disponibilizadas para plantio possuem eventos transgênicos. No entanto, a preocupação quanto ao consumo deste tipo de alimento levou o governo brasileiro a estabelecer, pelo decreto 4.660 de 25 de abril de 2003, que todo produto que contenha mais de 1% de OGM deve ser rotulado como “transgênico”. O objetivo deste trabalho foi implementar e validar técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR, Polymerase Chain Reaction) em tempo real para detectar alvos comuns a diversos eventos transgênicos (região promotora P-35S e terminadora T-NOS). Inicialmente foram obtidas 11 amostras, sendo três de sementes transgênicas (Pro, YieldGard e uma não identificada), sete de sementes convencionais e um farelo de milho orgânico utilizado para consumo animal. Foram desenhados os iniciadores (primers) e sondas (probes) específicos para detectar o promotor P-35S e o terminador T-NOS. O procedimento de análise consistiu na extração de DNA a partir das amostras das sementes (pré-germinadas ou não) pelo protocolo de adsorção em sílica, seguida da amplificação pela técnica de PCR em tempo real com as seguintes condições de amplificação: um ciclo inicial a 95°C por 3 min mais 40 ciclos de 95°C por 15 s e 60°C por 60 s. As curvas de amplificação foram visualizadas diretamente no equipamento e o ciclo limite (Ct, Cycle theshold) foi definido para cada amostra. Os resultados demonstraram a efetiva detecção dos dois alvos (P-35S e T-NOS) a partir da análise de uma amostra de semente transgênica e diluições decimais desta. Na avaliação comparativa, o PCR em tempo real para o alvo P-35S demonstrou melhor desempenho analítico (curvas mais bem definidas e menores valores de Ct) em comparação ao alvo T-NOS. Entre as três amostras de sementes transgênicas, uma apresentou resultado positivo para os dois alvos, uma apenas para P-35S e outra para T-NOS. Nas 8 amostras convencionais, nenhum dos dois alvos analisados foi detectado. Em conclusão, as analises realizadas podem ser aplicadas para a detecção de eventos transgênicos em Milho OGM. Novos estudos serão realizados para uma análise qualitativa e quantitativa de transgênicos em semente de milho e em produtos alimentícios.