Portal de Eventos da ULBRA., XIII FÓRUM DE PESQUISA CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA (Canoas)

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ANÁLISE DA REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO, MEDIADA POR FITO-HORMÔNIOS, DAS UREASES DE SOJA
Roberta da Silva e Silva, Felipe Antunes do Nascimento e Silva, Celia Regina Carlini, Arlete Beatriz Becker-Ritt

Última alteração: 07-01-2014

Resumo


A urease (EC 3.5.1.5) é uma uréia amidohidrolase dependente de níquel. Essa metaloenzima possui propriedades fungicidas e inseticidas, bem como, é capaz de promover agregação plaquetária, são consideradas proteínas de defesa, podendo ter sua expressão regulada por fito-hormônios. Genes de ureases foram induzidos pelo fito-hormônio ácido abscísico na leguminosa Canavalia ensiformis. A soja, uma das mais importantes culturas de interesse comercial no mundo, possui duas isoenzimas de urease: uma embrião-específica e outra ubíqua, ambas também similares à urease de C. ensiformes. Considerando que as ureases vegetais, além de estarem envolvidas no metabolismo de nitrogênio em plantas, também desempenham função de defesa nas mesmas, mecanismo esse ainda não totalmente elucidado e, conhecendo-se as rotas metabólicas desencadeadas pelos diferentes fito-hormônios, pretendemos, usando fito-hormônios, avaliar a expressão dos diferentes genes de urease no desenvolvimento de plantas de soja. A partir de um ensaio preliminar, 12 sementes de soja serão avaliadas quanto ao conteúdo de urease através do método qualitativo: “Seed Chip Assay”. Dessa coleção de sementes, as que possuírem maior e menor teores de soja serão selecionadas e germinadas em potes contendo terra, mantidas em BOD, até atingirem o estádio de desenvolvimento vegetativo V4. Ao alcançar esse estádio de desenvolvimento, soluções contendo 100 µM de cada um dos fito-hormônios (ácidos abscísico, jasmônico e salicílico) serão aplicadas através de “spray” nas plantas. Um grupo de plantas será utilizado como controle (solução sem o fito-hormônio e a outra parte não sofrerá exposição). Decorrida 1h da aplicação do fito-hormônio, folhas de cada uma das plantas tratadas e controles serão excisadas e o RNA total extraído. Após seleção do fito-hormônio serão feitas aplicações com soluções contendo as seguintes concentrações de fito-hormônio 0, 1, 3, 5, 10, 30, 50 e 100 µM, seguindo-se com a excisão das folhas das plantas expostas e controles e a extração de RNA total, a purificação do RNAm, a síntese de cDNA e a qPCR. Após a determinação da melhor concentração, será avaliado o melhor tempo de exposição: 0 min., 10 min., 30 min., 1h, 2 h, 12 h e 24 h. Será repetido o procedimento de excisão de folhas e extração de RNA total, purificação do RNAm, síntese de cDNA e qPCR. As plantas de soja serão submetidas à herbivoria usando lagartas de “Spodoptera”, uma praga da soja. Será permitida que 1 lagarta por planta, se alimente durante aproximadamente uma hora. Após esse período, as folhas das plantas serão excisadas, o RNA total será extraído, será realizada a síntese de cDNA e avaliação do número de transcritos de urease através de qPCR, conforme citado anteriormente. Todos os experimentos serão realizados, no mínimo, em triplicata. Os níveis de expressão relativa, durante os tratamentos serão analisados por ANOVA. Todas as análises estatísticas serão feitas com software GraphPad Prism (versão 3.0 para Windows).


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