Portal de Eventos da ULBRA., XIII FÓRUM DE PESQUISA CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA (Canoas)

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AVALIAÇÃO DOS EFEITOS CITOTÓXICOS E GENOTÓXICOS DA UREASE DE CANAVALIA ENSIFORMIS E DO PEPTÍDEO RECOMBINANTE JABURETOX EM LINHAGENS DE CÉLULAS TUMORAIS
Camila Saretta Portugal, Célia Regina Carlini, Arlete Beatriz Becker-Ritt

Última alteração: 07-01-2014

Resumo


As ureases são metalo-enzimas níquel dependentes que catalisam a hidrólise da uréia para formar amônia e ácido carbônico. As mesmas têm sido isoladas de uma grande variedade de organismos incluindo bactérias, fungos e plantas, mas até o momento não foram encontradas em animais. A atividade ureolítica das ureases permite que bactérias e fungos utilizem uréia como fonte de nitrogênio, possibilitando a sobrevivência desses microorganismos em ambientes ácidos, facilita a disponibilização de nitrogênio para embriões de plantas em desenvolvimento e, contribuem para o mecanismo de defesa. A leguminosa Canavalia ensiformis, também conhecida como feijão-de-porco possui três isoformas de ureases conhecidas até o momento, a Jack Bean Urease (JBU); a jbure-II, o qual teve seu cDNA expresso em Escherichia coli para a produção do peptídeo recombinante jaburetox (JBTX) e a canatoxina (CNTX). Estudos demonstraram que as ureases de C. ensiformis possuem propriedades biológicas independentes da atividade enzimática, incluindo atividade inseticida e antifúngica, efeito secretório e ativação de plaquetas, efeito pró-inflamatório, ativação da via dos eicosanóides, formação de poros e atividade de canal iônico. Pretende-se com este trabalho avaliar o efeito da urease JBU de C. ensiformis, bem como do peptídeo Jaburetox (JBTX) em linhagens de células tumorais e investigar os efeitos citotóxicos e genotóxicos. Serão utilizadas linhagens celulares derivadas de adenocarcinoma de mama humano, carcinoma de ovário humano, adenocarcinoma de cólon humano, glioblastoma humano, câncer de pulmão humano e fibroblasto murino. Para a avaliação da citotoxicidade serão realizados os ensaios MTT (dimetil tiazoldifenil tetrazolium), para estimativa de proliferação e sobrevivência celular, e o ensaio de sobrevivência clonogênica, que estima a sobrevivência de células in vitro com base na capacidade de uma única célula crescer e formar colônia. A determinação da genotoxicidade será realizada através do ensaio cometa, o qual detecta danos no DNA que são passíveis de correção, como quebras, excisão e ligações cruzadas; e do teste de micronúcleos que avalia indiretamente quebras cromossômicas permanentes e perda cromossomal. Sendo as ureases enzimas de interesse bioquímico e biotecnológico e, considerando seus efeitos tanto no contexto farmacológico quanto toxicológico, é pertinente a investigação dos possíveis efeitos destas proteínas em linhagens de células tumorais e não tumorais, de modo a investigar se a mesma possui propriedades citotóxicas e/ou genotóxicas. Os possíveis mecanismos tornam-se relevantes para elucidação dos modos de ação em insetos, em fungos e na patogênese de algumas doenças bacterianas.


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