Portal de Eventos da ULBRA., XX SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA

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DETECÇÃO DE EVENTOS TRANSGÊNICOS DE SOJA EM SEMENTES E FARINHAS PELA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) EM TEMPO REAL
Matheus Kunrath Oliveira, Cícero Milhano Kommers, Nilo Ikuta, Vagner Ricardo Lunge

Última alteração: 17-10-2014

Resumo


A soja (Glycine max) é a principal cultura agrícola do país com aproximadamente 53% das lavouras de grãos. O crescente aumento da área plantada e de produtividade está associado ao aumento da eficiência dos produtores, ao manejo otimizado e aos avanços tecnológicos, como o uso de cultivares transgênicas (OGMs, organismos geneticamente modificados). As cultivares transgênicas estão sendo utilizadas pelos produtores e apresentam basicamente cinco eventos: BtRR2Y, A-2704-12 (Liberty Link), A5547-127 (Liberty Link), BPS-CV127-9 (Cultivance) e GTS-40-3-2 (Roundup Ready ou RR). Com a produção de OGMs, políticas de controle na comercialização de produtos alimentícios foram adotadas em inúmeros países. No Brasil, o Decreto n° 4680/03 determina que qualquer produto que contenha acima de 1% de OGM em sua composição final deve ser rotulado como transgênico. O presente trabalho objetivou a validação de técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real para a detecção de eventos transgênicos de soja em sementes e farinhas. Foram obtidas 24 sementes (20 RR, 3 convencionais e uma Intacta RR2 PRO, recentemente introduzida no mercado) e 6 farinhas controle (positivas para o evento GTS 40-3-2). Foram desenhados 4 conjuntos de pares de iniciadores (primers) e as respectivas sondas (probes) para a detecção dos genes da lecitina (constitutivo da soja), CP4 – EPSPS (resistência ao glifosato/Roundup), promotor P-35S e terminador T-NOS. A extração do DNA foi realizada pelo método de adsorção em sílica a partir de sementes pré-germinadas e farinhas. As amplificações foram realizadas pela técnica de PCR em tempo real com as seguintes condições: um ciclo inicial a 95°C por 3 min mais 40 ciclos de 95°C por 15 s e 60°C por 60 s. As curvas de amplificação foram visualizadas diretamente no equipamento e após foi definido o ciclo limite (Ct, Cycle treshold) de cada amostra. Além disso, as amostras foram submetidas à detecção em gel de poliacrilamida para visualização dos produtos do PCR. Os resultados demonstraram que as 20 sementes RR foram positivas para os quatro alvos analisados, enquanto a amostra Intacta RR2 PRO e as sementes convencionais apresentaram resultado positivo apenas para lecitina. As 6 farinhas positivas foram detectadas com os alvos P-35S e CP4-EPSPS (além da lecitina), mas apenas 4 pelo T-NOS. Na avaliação comparativa, as técnicas de PCR para os alvos P-35S e CP4-EPSPS demonstraram melhor desempenho analítico (curvas bem definidas e valores menores de Ct) em comparação ao alvo T-NOS. Estes dados indicam que os testes podem ser aplicados na detecção de eventos transgênicos presentes em sementes de soja OGMs RR, mas não Intacta RR2 PRO (testes específicos devem ser desenvolvidos para análise de produtos com estas sementes transgênicas). Novos estudos estão sendo realizados para análise qualitativa e quantitativa de transgênicos em sementes e em produtos alimentícios derivados de soja.