Portal de Eventos da ULBRA., XXII SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA

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ANÁLISE DA EXTRAÇÃO DE DNA DE Mycobacterium tuberculosis DE AMOSTRA CLÍNICA PELA COMPARAÇÃO DE MÉTODOS
Franciele Costa Leite Morais, Grazielle Lima Bello, Maria Lúcia Rossetti

Última alteração: 22-02-2017

Resumo


A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa, com altos índices de mortalidade. A técnica de extração através de beads-magnéticas é fundamentada na interação do DNA com partículas magnéticas revestidas de sílica. A técnica de extração por resina de sílica é baseada na interação da sílica com grupamentos do DNA. A extração de DNA por ultrassom consiste no rompimento da parede celular bacteriana pela emissão de vibrações ultrassônicas. Considerando que o método selecionado para extrair DNA presente na amostra clínica é um fator relevante, podendo influenciar na acurácia das técnicas de amplificação. Este trabalho foi realizado visando à comparação das três técnicas de DNA descritas acima para isolar DNA de M. tuberculosis de amostras de escarro. Foi realizado um pool com 10 amostras negativas para tuberculose, posteriormente foram contaminadas com Mycobacterium Bovis BCG, e dividas em 10 alíquotas. As amostras foram centrifugadas e ressuspendidas em TE 1X até atingir o volume de 1,5 mL. Após foram divididas em três alíquotas de volume igual. Cada alíquota foi processada pelas três técnicas. A extração de DNA por sílica foi realizada com os reagentes componentes do kit DETECT-TB (Labtest. MG). A extração de DNA através de BEADS-MAGNÉTICAS foi realizada utilizando reagentes que compõem um protótipo de kit de extração de DNA da empresa Ampligenix (MG). A extração de DNA por ULTRASSOM utilizou o protocolo adaptado de SCHIMID, 2014. O DNA purificado das amostras foi amplificado por PCR convencional, utilizando o kit DETECT-TB, que amplifica um fragmento de 245 pb com primers específicos da região de DNA (IS6110). Posteriormente foi realizado uma eletroforese em gel de agarose 1,5%. Foram analisadas 10 amostras positivas com cada técnica. Os produtos de amplificação dos DNAs extraídos pelas três técnicas apareceram como bandas no gel de agarose. O método que utiliza a sílica apareceu como uma banda forte em todas as amostras. As BEADS-MAGNÉTICAS apresentaram uma amostra como banda fraca e no método de ULTRASSOM uma amostra com banda bem fraca e outra não amplificou.  Os resultados iniciais mostraram que o método de extração que utiliza a sílica para purificar o DNA foi o que recuperou uma concentração de DNA maior em todas as amostras, demonstrando uma sensibilidade maior em relação as outras técnicas testadas que também deram positivas. Ainda será realizado o teste com outras amostras.


Palavras-chave


tuberculose; extração de DNA; amplificação.

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